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        基因/miRNA表達水平分析驗證

        作者:admin 更新時間:2022-08-01 點擊數:

          定量PCR(即時聚合酶鏈鎖反應,Real-time Polymerase Chain Reaction,簡稱 Real-time PCR、即時PCR),又稱定量即時聚合酶鏈鎖反應(Quantitative real time polymerase chain reaction,簡稱即時定量PCR)。定量PCR技術是指以外參或內參為標準,通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測,進行PCR起始模板量的定量。該技術可以準確的檢測基因的相對表達量和絕對表達量,被廣泛地應用與基因表達水平的研究。同時,它也作為一些組學技術的驗證,比如轉錄組測序、表達芯片等實驗結果驗證。


        1. 技術重復質量評估分析;

        2. Ct值計算

         △Ct(Treated)= CT(Treated_gene A)-CT(Treated_housekeeping gene)

         △Ct(Control)= CT(Control_gene A)-CT(Control_ housekeeping gene)

         △△Ct=△Ct(Treated)-△Ct(Control)

        3. 對于有生物學重復的檢測,計算SD和p-value。

         


        與RT-PCR相比,熒光定量PCR具有以下技術優勢:

        1、實時監測:通過擴增曲線能夠實時監測PCR產物的積累。

        2、特異性強:實驗完成后,溶解曲線的分析可以驗證擴增產物的特異性,降低假陽性。

        3、精確定量:利用擴增進入指數增長期的CT值來定量測定起始模板量,從而實現了極為精確的核酸定量檢測。



        (一)樣品類型

          1. 總RNA;樣品濃度:≥250 ng/ul;樣品總量:>5ug;樣品純度: OD260/280為1.8~2.2,OD260/230≥1.0,260nm處有正常峰值。RNA完整性: 電泳檢測28S/18S≥1.5。

          2. 組織:樣品取樣后立即液氮速凍,保存于液氮或超低溫冰箱中。請盡量使用新制備的樣品且樣品量至少滿足3次以上提??;

         

        (二)樣本運輸

          1. 總RNA樣品請溶于RNase-free H2O或乙醇中,置于1.5 ml RNase-free離心管中,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時間,管口使用Parafilm封口,干冰運輸;

          2. 樣本取樣后置于凍存管中并標注,使用足量的干冰運輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運輸過程中樣品降解的可能性。


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        3、 確認報價沒有問題,然后把樣品送到我們實驗室

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        飛凡檢測致力于打造國內專業的第三方檢測服務公司,不斷優化整合市場檢測資源,飛凡檢測與多家科研院所,如上海同濟大學,蘇州大學,SGS,TUV,以及國內眾多知名的檢測公司進行深度合作,共同為國內制造業服務,為中國的制造業開拓海外市場保駕護航,為我們日常生活的健康安全樹立標桿;公司目前工程師百余人,95%以上是本科以上學歷;我們合作的實驗室通過CNAS,CMA(EZ),所出具的任何一張報告都有CNAS,CMA資質,確保出具的每份報告都具有權威的法律效力。



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